共聚焦显微镜是一种非常流行的高质量图像技术。由于相对简单的样品制备,在使用组织或生物样品时非常有用。共聚焦显微镜是传统传统的替代品。虽然在传统显微镜中,我们具有宽的领域,其中样品表面上的大部分元素具有聚焦显微镜,可以使用消除聚焦光超出焦点的空间过滤器在不同深度处观察样品。
共聚焦显微镜在1955中发明:扫描样品并创建点对点图像。光通过一系列销孔,该尖孔消除了未聚焦的光,从而增加了图像分辨率。我们在此讨论类似的系统:可以通过移动样品或通过XY扫描镜来进行样品的扫描。图1显示了系统的示意图。
在光学组件方面,我们需要一个非常强烈的光源。在光源之后,我们具有滤波器(通常称为激励滤波器),其中仅在非常特定的波长通过。从这个过滤器,我们去了一面二向色镜子。二向色反射镜具有非常具体的传输和两个不同波长的反射系数,即它们允许在反映其他波长的同时传输一个波长。在我们的案件中。我们将反映来自励磁过滤器的光,并且该光束将被镜头聚焦到样品中。然后通过该特定波长激发样品,并且在我们试图检测的生物分子中发生荧光。然后将由生物分子发出的光,然后将由荧光传递回二向色镜。在该第二通道上,发射的光穿过镜子,然后通过针孔(这个称为发光滤波器),然后到眼睛或相机。
共聚焦显微镜的一个很大优点是创建3D样本图像的能力。沿光轴从光学切片获得的数据用于使用软件和图像处理重建3D图像。图。图2示出了从直径为2mm的悬架的切片的3D重建。
共聚焦显微镜提供传统显微镜的显着成像改进。它会创建更清晰,更详细的2D图像,并允许在三个维度中收集数据。